La genomaj sekvencoj de la plej multaj virusoj estis konataj.Nukleacido-sondiloj kiuj estas mallongaj segmentoj de DNA dizajnitaj por hibridigi kun komplementaj virusaj DNA aŭ RNA-segmentoj.La polimeraza ĉenreakcio (PCR) estas pli efika tekniko por virusdetekto.Altaj trairaj diagnozaj metodoj estis evoluigitaj lastatempe.
A. Nukleacida hibridigo tekniko
Nukleacida hibridiĝo, ĉefe inkluzive de Suda makulo (Suda) kaj Norda makulo (Norda), estas rapida evoluiga nova tekniko en la virusa diagnoza kampo.La raciaĵo de la hibridanalizo estas uzi mallongajn segmentojn de DNA (nomitaj "enketo") dizajnitaj por hibridigi kun komplementa virusa DNA aŭ RNA-segmentoj.Per hejtado aŭ alkala traktado, duoble-fadena cela DNA aŭ RNA estas apartigitaj en ununurajn fadenojn kaj poste estas senmovigitaj sur solida subteno.Post tio, enketo estas aldonita kaj hibridigita kun la cela DNA aŭ RNA.Ĉar la enketo estas etikedita kun izotopo aŭ ne-radiaktiva nuclido, la cela DNA aŭ RNA povas esti detektitaj tra aŭtoradiografio aŭ per la biotin-avidin sistemo.Ĉar la plej multaj el virusgenaroj estis klonitaj kaj sekvencitaj, ili povas esti detektitaj uzante virus-specifajn sekvencojn kiel enketojn en la specimeno.Nuntempe, la hibridigmetodoj inkluzivas: punktan makulon, surloke hibridiĝon en ĉeloj, DNA-makuligo (DNA) (Suda makulo) kaj RNA-makuligo (RNA) (Norda makulo).
B.PCR-Teknologio
En la lastaj jaroj, serio de en vitro nuklea acida plifortigaj teknikoj estis evoluigita surbaze de PCR, por testi nesentemajn aŭ nekultiveblajn virusojn.PCR estas metodo kiu povas sintezi specifan DNA-sekvencon per en vitra polimerazreago.La procezo de PCR inkluzivas termikan ciklon de tri ŝtupoj: denaturado , kalciado , kaj etendo Je alta temperaturo (93℃~95℃), la duoble-fadena DNA estas apartigita en du ununurajn DNA-fadenojn;tiam ĉe malalta temperaturo (37 ℃ ~ 60 ℃), du sintezitaj nukleotidaj enkondukoj anelas al la komplementaj DNA-segmentoj;dum ĉe la konvena temperaturo por Taq-enzimo (72 ℃), sintezo de novaj DNA-ĉenoj komenciĝas de enkonduko 3'fino uzante komplementan DNA kiel ŝablonojn kaj ununurajn nukleotidojn kiel materialojn.Do post ĉiu ciklo, unu DNA-ĉeno povas esti plifortigita en du ĉenojn.Ripetante ĉi tiun procezon, ĉiu DNA-ĉeno sintezita en unu ciklo povas esti uzata kiel ŝablono en la sekva ciklo, kaj la nombro da DNA-ĉenoj estas duobligita en ĉiu ciklo, kio signifas, ke la produktado de PCR estas plifortigita en 2n lograpideco.Post 25 ĝis 30 cikloj, la produktado de PCR estas identigita per elektroforezo, kaj la specifaj DNA-produktoj povas esti observitaj sub UV-lumo (254nm).Por ĝia avantaĝo de specifeco, sentemo, kaj oportuno, PCR estis adoptita en klinika diagnozo de multaj virusinfektoj kiel ekzemple HCV, HIV, CMV, kaj HPV.Ĉar PCR estas tre sentema, ĝi povas detekti virusan DNA je fg-nivelo, la operacio devas esti farita tre zorge por eviti falsan pozitivon.Krome, pozitiva rezulto en nuklea acida testo ne signifas, ke ekzistas viva infekta viruso en la specimeno.
Kun larĝa apliko de PCR-tekniko, novaj teknikoj kaj metodoj estas evoluigitaj surbaze de PCR-tekniko por malsama testa celo.Ekzemple, la realtempa kvanta PCR povas detekti virusŝarĝon;en situ PCR estas uzata por identigi virusinfekton en histo aŭ ĉeloj;La nestita PCR povas pliigi la specifecon de PCR.Inter ili, realtempa kvanta PCR estis evoluigita pli rapide.Multaj novaj teknikoj, kiel ekzemple TaqMan-hidrolizsondilo, hibridigo-enketo, kaj molekula signostango-enketo, estis kombinitaj en realtempan kvantan PCR-teknikon, kiu estas vaste utiligita en klinika esplorado.Krom identigi la virusŝarĝon en la korpa fluido de pacientoj precize, ĉi tiu metodo ankaŭ povas esti uzata por detekti drog-tolereman mutaciulon.Tial, realtempa kvanta PCR estas plejparte aplikata en kuraca efiko-taksado kaj drog-toleremo-gvatado.
C. Alt-trafia detekto de virusaj nukleaj acidoj
Por renkonti la bezonojn por rapida diagnozo de novaj emerĝaj infektaj malsanoj, diversaj alt-produktaj detektmetodoj, kiel DNA-fritoj (DNA), estis establitaj.Por DNA-fritoj, specifaj enketoj estas sintezitaj kaj alkroĉitaj al malgrandaj siliciaj pecetoj en tre alta denseco por formi DNA-enketmikroarray (DNA) kiu povas esti hibridigita kun provaĵo.La signalo de hibridigo povas esti bildigita per konfokusa mikroskopo aŭ lasera skanilo kaj esti plu prilaborita per la komputilo kaj grandega datumaro koncerne malsamajn genojn povas esti akirita.Estas du specoj de DNA-blato.La "sinteza blato" estas jena: la specifaj oligonukleotidoj estas sintezitaj rekte sur la blatoj.Alia estas DNA-naĝejo.La klonitaj genoj aŭ PCR-produktoj estas bonorde presitaj sur la lumbildo.La avantaĝo de DNA-ĉipteknologio estas la samtempa detekto de grandega kvanto de DNA-sekvencoj.La plej nova versio de patogendetekta blato povas identigi pli ol 1700 homajn virusojn samtempe.DNA-blato-teknologio solvis la problemojn de tradiciaj nukleaacidaj hibridigmetodoj kaj havas tre larĝajn aplikojn en virusdiagnozo kaj epidemiologia studo.
Afiŝtempo: Dec-23-2020